» Как правильно собирать

Проба лоури как собирать правильно

Анализ мочи по Нечипоренко. Расшифровка анализа. Норма эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров в анализе, причины повышения значений этих показателей. Виды цилиндров мочи – гиалиновые, эритроцитарные, зернистые, восковидные, эпителиальные.

Сайт предоставляет справочную информацию. Адекватная диагностика и лечение болезни возможны под наблюдением добросовестного врача.

Анализ мочи по Нечипоренко – это один из методов исследования состава мочи. Это обследование назначается для диагностики острых и хронических воспалительных заболеваний почек и мочевыводящих путей. В анализе исследуется точная концентрация лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров.

Зачем назначается анализ мочи по Нечипоренко?

В том случае, если общий анализ крови выявил повышение уровня лейкоцитов, эритроцитов или было обнаружено присутствие в моче цилиндров, назначается дополнительное исследование – Анализ по Нечипоренко.

Что определяют в моче при анализе по Нечипоренко?

Лейкоциты – это живые клетки нашего организма циркулирующие с током крови. Эти клетки осуществляют иммунный контроль. В случае возникновения инфекции, повреждения организма токсическими или иными инородными телами или веществами эти клетки борются с повреждающими факторами. Наличие лейкоцитов в моче сверх нормы указывает на наличие воспалительного процесса в почках или мочевыводящих путях (почечные лоханки, мочеточники, мочевой пузырь, уретра и простата у мужчин).

Эритроциты – это красные кровяные тельца малого размера. Это наиболее многочисленные клетки крови. Основной их функцией является перенос кислорода и доставка его к органам и тканям. В норме эритроциты в моче не должны быть, их присутствие возможно, но в очень малых количествах (не более 3-х в поле зрения). Обнаружение большего количества эритроцитов может свидетельствовать о серьезной патологии почек или мочевых путей.

Цилиндры – это белковые тела, которые в случае серьезной патологии образуются в почечной ткани (в почечных канальцах). Цилиндры могут быть разными по составу и включать в себя следующие элементы: эритроциты, слущеные клетки почечных канальцев, белок. По внешнему виду они так же отличаются и бывают: зернистыми (в составе преобладают эритроциты и клетки почечных канальцев), гиалиновыми (преобладают клетки почечных канальцев и белок), эритроцитарными (основу таких цилиндров составляют эритроциты).

Как собрать мочу для анализа мочи по Нечипоренко?

Для того, чтобы правильно собрать мочу для анализа следует соблюдать несколько правил:

• Перед исследованием необходимо подмывание без использования мыла и иных гигиенических средств. Нечистоты наружных половых органов могут содержать множество бактерий. При мочеиспускании часть из этих бактерий может оказаться в моче. Так же использование мыла и прочих дезинфицирующих средств запрещено – с током мочи остатки моющего средства могут попасть в собранную мочу и повлиять на ее количественный состав.
• Необходимо взять чистую тару (лучше, чтобы это был мерный пластиковый лабораторный стаканчик или контейнер с плотно закрывающейся крышечкой).
• Женщинам в период менструации стоит воздержаться от сбора мочи для анализа. Выделяемая менструальная кровь может быть смыта с наружных половых органов при мочеиспускании и принята в лаборатории за кровь из мочевыводящей системы.
• В период сбора мочи не рекомендуется принимать антибиотики или употреблять пищу окрашивающую мочу.
• Во время мочеиспускания первые несколько секунд необходимо помочиться в унитаз, оставшуюся порцию мочи следует собрать в контейнер.
• Для анализа требуется сбор утренней мочи.
• Моча, собранная для анализа, должна быть доставлена в лабораторию как можно скорее в течение нескольких часов. Длительное хранение мочи может привести к тому, что в ней начнут активно размножаться бактерии.

О том как собрать мочу и как ее исследуют

Нормальные показатели лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров в анализе мочи по Нечипоренко

• Лейкоциты: менее 2000 в 1 мл
• Эритроциты: менее 1000 в 1 мл
• Цилиндры: менее 20 гиалиновых в 1 мл, обнаружение любых других видов цилиндров является патологией

Расшифровка анализа мочи по Нечипоренко

Повышены лейкоциты (более 2000 в 1 мл)

Повышены эритроциты (более 1000 в 1 мл)

Цилиндры в моче - количество гиалиновых 20, или иные виды цилиндров в любом количестве

Повышение количества гиалиновых цилиндров (свыше 20 в 1 мл) и обнаружение в любом количестве других видов цилиндров является признаком почечной патологии.

Повышение количества гиалиновых цилиндров (свыше 20 в 1 мл).
Эти цилиндры образуются из белка, который не успевает реабсорбироваться (возвращаться из первичной мочи в состав крови) во время прохождения первичной мочи по почечным канальцам.

• Пиелонефрит
• Хронический гломерулонефрит или острый гломерулонефрит
• Гипертоническая болезнь
• Прием мочегонных препаратов

Зернистые цилиндры (обнаружение этих цилиндров в любом количестве является патологией) Этот вид цилиндров образуется в результате разрушения клеток, выстилающих внутреннюю поверхность почечного канальца.

• Гломерулонефрит
• Пиелонефрит
• Отравление свинцом
• Вирусные инфекции

Восковидные цилиндры (обнаружение этих цилиндров в любом количестве является патологией). Восковидные цилиндры образованы в результате длительного пребывания в провеете канальца гиалинового или зернистого цилиндра.

• Хроническая почечная недостаточность
• Амилоидоз почек
• Нефротический синдром

Эритроцитарные цилиндры (обнаружение этих цилиндров в любом количестве является патологией). В норме красных клеток крови в просвете почечного канальца не должно быть. Однако, в результате нарушений проницаемости сосудистой стенки почечного клубочка эритроциты могут проникать в просвет почечного канальца. Все проникшие в почечный каналец эритроциты выводятся вместе с мочой. Однако в случае массивного проникновения эритроцитов в почечный каналец происходит его закупорка с формированием эритроцитарных цилиндров.

• Острый гломерулонефрит
• Инфаркт почки
• Тромбоз почечных вен
• Злокачественная гипертензия

Эпителиальные цилиндры (обнаружение этих цилиндров в любом количестве является патологией).
Образуются в результате отторжения эпителия почечного канальца. Эти цилиндры свидетельствуют о серьезной почечной патологии.

• Острый канальцевый некроз
• Острая вирусная инфекция
• Отравление солями тяжелых металлов и иными нефротоксическими веществами (этиленгликоль, фенолы)
• Передозировка токсических для почек препаратов (салицилаты)

Специальность: Практикующий доктор 2-й категории

1. Колориметрические методы определения белка

При определении белка в лекарственных препаратах при помощи колориметрических методов предварительно строят калибровочный график с использованием стандартного образца белка, указанного в частных статьях (бычьего сывороточного альбумина, сывороточного альбумина человека или аминокислоты тирозина).

При определении белка в испытуемых пробах соблюдают те же условия проведения реакций и измерения поглощения растворов, что и при построении калибровочного графика.

1. Определение белка с биуретовым реактивом

Метод основан на образовании в щелочной среде окрашенного в фиолетовый цвет комплекса ионов двухвалентной меди с пептидными связями молекулы белка.

Биуретовую реакцию нельзя проводить в присутствии солей аммония из-за образования медно - аммиачных комплексов.

1 мл раствора препарата, содержащего 1-10 мг испытуемого белка, помещают в пробирку, прибавляют 4 мл биуретового реактива, перемешивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Оптическую плотность раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны в диапазоне от 540 до 650 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без препарата.

Калибровочный график строят в пределах концентраций от 1 до 10 мг стандартного образца белка, измеряя оптическую плотность растворов при выбранной длине волны.

2. Микроопределение белка с реактивом Бенедикта

Принцип метода тот же, что и при определении белка с биуретовым реактивом.

2 мл раствора препарата, содержащего 0,1-2 мг испытуемого белка, помещают в пробирку, прибавляют 2 мл 6% раствора натра едкого, 0,2 мл реактива Бенедикта, перемешивают и оставляют на 15 мин при комнатной температуре. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при длине волны 330 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без препарата.

Калибровочный график строят в пределах концентраций от 0,1 до 2 мг стандартного образца белка, измеряя оптическую плотность раствора при 330 нм.

3. Определение белка по методу Лоури

Метод основан на образовании окрашенных продуктов ароматических аминокислот и цистеина с реактивом Фолина в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи.

1 мл раствора препарата, содержащего 0,025-0,250 мг испытуемого белка, помещают в пробирку, прибавляют 2 мл реактива 1 и оставляют при комнатной температуре на 10 мин. Затем прибавляют 0,5 мл реактива Фолина, перемешивают и через 30-40 мин измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 750 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без препарата.

Калибровочный график строят в пределах концентраций от 0,025 до 0,250 мг стандартного образца белка, измеряя оптическую плотность растворов при 750 нм.

4. Определение белка по методу Лоури

в модификации Сяткина

Метод Лоури в модификации Сяткина используют для определения содержания белка в препаратах с повышенным содержанием липо- и гликопротеидов.

0,1 мл раствора препарата, содержащего 0,5-2,5 мг испытуемого белка, помещают в пробирку, прибавляют 0,8 мл раствора натра едкого (1 моль/л) и 0,1 мл 1% раствора натрия дезоксихолата, затем прибавляют 4 мл реактива II, смесь перемешивают. После просветления раствора прибавляют 0,5 мл реактива Фолина, немедленно перемешивают и оставляют на 30 мин в темном месте при комнатной температуре. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при длине волны 750 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без препарата.

Калибровочный график строят в пределах концентраций от 0,5 до 2,5 мг стандартного образца белка, измеряя оптическую плотность растворов при 750 нм.

Лабораторная работа №7

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКА МЕТОДОМ ЛОУРИ

Принцип метод. Метод основан на образовании окрашенных продуктов ароматических аминокислот с реактивом Фолина в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи. Метод характеризуется высокой чувствительностью (10 — 100 мкг белка в пробе). Ha развитие окраски влияет большое количество веществ: компоненты буферных систем (трис-буфер в концентрации0,2 мМ, глицилглицин), восстановители (цистеин, дитиотреитол в концентрации 0,01 —0,4 мМ, аскорбиновая кислота), комплексоны (ЭДТА в концентрации0,5 мМ), детергенты (тритон X100 в концентрации 0,1 — 0,2 % вызывает выпадение осадка), сернокислый аммоний в концентрации 0,15 %, сахароза в концентрации 10 % и др. В связи с этим при построении калибровочного графика для определения белка по методу Лоури в растворитель для стандартного белка необходимо включать все компоненты, содержащиеся в анализируемых пробах. B некоторых случаях целесообразно предварительное осаждение белков из растворов, например трихлоруксусной кислотой, с последующим растворением их в щелочных растворах, или очистка белковых растворов от низкомолекуляриых компонентов путем диализа или гель-фильтрации на сефадексе G-25.

Интенсивность окраски комплекса, которая пропорциональна количеству белка в исследуемой пробе, измеряется спектрофотометрически.

Для исключения случайных ошибок, которые могут возникать в процессе измерения, рекомендуется не огра­ничиваться одним измерением (готовят 2 ряда пробирок)

При определении концентрации вещества в растворе следует соблюдать следующую последовательность в ра­боте:

а) построение калибровочной кривой для данного ве­щества;

б) измерение оптической плотности исследуемого рас­твора и определение концентрации вещества в растворе по калибровочной кривой.

Реактив №1: 2 %-й раствор Na₂ CO₃ в 0,1 н. растворе NaOH.

Реактив №2: 0,5 %-й раствор CuSO4 * 5H₂ O в 1%-м цитрате натрия.

Реактив №3 готовится непосредственно перед работой: 15 мл реактива I + 0,3 мл реактива №2.

Реактив №4 Реактив Фолина — Чокальтеу: 10 гNa₂ Wo₄ *2H₂ O (перекристаллизованный) и 2,5 г Na₂ MoO₄ *2H₂ 0 помещают в круглодонную колбу на 200 — 250 мл, приливают 70 мл воды и хорошо перемешивают. K полученному раствору добавляют 5 мл 85 %-го раствора фосфорной кислоты и 10 мл концентрированной HCl (x.ч.). Колбу присоединяют к обратному холодильнику (на шлифе), ставят на сетку и кипятят в течение 10 ч. Затем в раствор добавляют 15 г Li₂ SO₄. 5 мл воды и одну каплю брома. Раствор перемешивают и нагревают для удаления брома. После охлаждения доводят водой до 100 мл, фильтруют и разводят водой с таким расчетом, чтобы получился 1 н раствор кислоты (т.е. приблизительно вдвое). Кислотность определяют титрованием разведенного в 10 раз реактива 0,1 н. щелочью в присутствии фенолфталеина. Реактив может храниться в темной склянке длительное время.

Реактив №5: стандартный раствор белка, содержащий 0,25 мг в 1 мл раствора.

Реактив №6: раствор белка концентрации Х.

Оборудование: пробирки; кюветы, спектрофотометр.

Используя стандартный раствор белка и дистиллированную воду в 4 пробирках готовят растворы белка различной концентрации. Пятая проба не содержит белка и служит контролем на реактивы. В шестую пробирку помещают 0,4 мл р-ра белка неизвестной концентрации-Х (см. таблицу).

Во все пробирки добавляем по 2 мл реактива №3, смесь тщательно перемешивают. Через 10 мин добавляют 0,2 мл реактива №4 Фолина — Чокальтеу. Реакционную смесь перемеши­вают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин.

Интенсивность развившейся окраски измеряют спектрофотометрически (при длине волны 750 или 500 нм) Построение калибровочной кривой производят следу­ющим образом. Измеряют оптичес­кие плотности каждого из этих растворов и строят график (калибровочную кривую), откладывая по горизонтальной оси (ось абсцисс) известные концентрации, а по вертикаль­ной оси (ось ординат) —соответствующие им значения оп­тической плотности.

Пользуясь калибровочной кривой, определяют неиз­вестную концентрацию белка в исследуемом растворе, соответствующую измеренному значению оптической плот­ности.

B случае предварительного осаждения белка к исследуемому раствору добавляют CCl₃ COOH из такого расчета, чтобы конечная концентрация ее была равна 3 — 4 %. Раствор тщательно перемешивают и оставляют на 10—20 мин. Выпавший осадок белка отделяют центрифугированием и промывают 2%-ным раствором CCl₃ COOH. K осадку добавляют 1 — 2 мл 1 н. раствора щелочи и осторожно подогревают до растворения осадка белка. Раствор белка количественно переносят в мерную колбу на 25 — 50 мл, доводят водой до метки, тщательно перемешивают и проводят определение белка.

Метод основан на способности ароматических аминокислот (трип­тофана, тирозина и в меньшей степени фенилаланина) поглощать ульт­рафиолетовый свет с максимумом при 280 нм. Измеряя величину опти­ческой плотности при этой длине волны, находят количество белка в растворе. Поскольку белки отличаются по содержанию ароматических аминокислот, их поглощение в ультрафиолетовой области спектра мо­жет сильно различаться. Условно считают, что при концентрации «ус­редненного» белка в растворе, равной 1 мг/мл, величина оптической плотности при 280 нм равна 1,0 (при толщине слоя жидкости в1 см).

Определению белка данным методом мешает присутствие нуклеи­новых кислот и нуклеотидов.

Реактивы: растворы сывороточного альбумина, яичного альбумина концентрация белка 1 мг/мл.

Оборудование: пробирки; кюветы, спектрофотометр.

Измеряя оптическую плотность раствора при 260 нм (для учета поглощения соединений нуклеотидной природы) и 280 нм (в качестве кюветы сравнения используют кювету с дистиллированной водой), содержание белка рассчитывают с помощью номограммы: экспериментально полученные величины оптической плотнос­ти при 260 и 280 нм находят в соответствующих столбцах номограммы и соединяют их прямой линией; точка пересечения этой прямой со шка­лой, на которой дана концентрация белка, определяет содержание бел­ка в исследуемом растворе.

Содержание белка можно найти по формуле Калькара на основе данных определения оптической плотности при 280 и 260 нм:

Содержание белка =1,45 •λ ₂₈₀ —0,74 • λ ₂₆₀ (мг/мл).

Рис. 1. Номограмма для определения белка

Источники: http://www.polismed.com/articles-analiz-mochi-po-nechiporenko-01.html, http://www.studfiles.ru/preview/6065773/page:2/, http://ebooks.grsu.by/lab_pr_bio/laboratornaya-rabota-7-kolichestvennoe-opredelenie-soderzhaniya-belka-metodom-louri.htm

Комментариев пока нет!

Поделитесь своим мнением